1-2-6-1-2- اهمیت سلامت DNA اسپرم. 11 1-2-6-2-استرس اکسیداتیو در اسپرم. 12 1-2-6-3- استرس اکسیداتیو و بیماری­های دیگر. 12 1-2-7- اثراتROS.. 13 1-2-7-1- پراکسیداسیون لیپیدی غشای پلاسمایی اسپرم. 13 1-2-7-2- اثر روی تحرک اسپرم. 13 1-2-8- ROS و استرس اکسیداتیو مایع منی.. 13 1-2-9- ROS و ناباروری.. 14 1-2-10- آنتی اکسیدان­ها 15 1-2-10-1- نحوه عملکرد آنتی­اکسیدان­ها به دو روش طبقه بندی میشود: 16 1-2-11- اثرات آنتی­اکسیدان­ها 18 1-2-11-1- تاثیر بر تحرک اسپرم. 18 1-2-11-2- تاثیر بر روی کاهش آسیب­های بعد از انجماد اسپرم. 18 1-2-11-3- تاثیر آنتی­اکسیدان­ها در جلوگیری از آسیب بهDNA… 18 1-2-12- نقش آنتی­اکسیدان­ها (رباینده­های­بالقوهROS) دراسپرم. 19 3-1- ژنتیک و ناباروری مردان.. 20 1-3-1- ژن انتخابی مورد مطالعه. 21 1-4- اهداف: 22 1-5-فرضیات: 22 فصل دوم مروری بر مطالعات گذشته 2-1- مروری بر مطالعات علمی گذشته. 24 فصل سوم مواد و روش­ها 3-1- تعیین گروه­های آزمایشی.. 30 3-2- جمع آوری نمونه­ها و محل انجام آزمایش…. 30 3-3- القاء استرس اکسیداتیو با تزریق t-BHP.. 31 3-4- تک سلول کردن بافت بیضه. 31 3-5- شمارش تعداد سلول­های زنده در بافت بیضه. 32 3-6-1- روش فلوسایتومتری.. 32 3-6-2- سنجش ROS در بیضه بوسیله فلوسایتومتری.. 34 3-7- روشهای تعیین آسیب DNA اسپرم. 35 3-7-1- تست TUNEL جهت ارزیابی شکست DNAاسپرم. 36 3-7-2- جمع‌آوری سلول‌های اسپرمی جهت آنالیز شکستهای DNA اسپرم. 37 3-7-3- محلولها و بافرهای مورد نیاز جهت روش TUNEL، به منظور ارزیابی شکست DNA اسپرم. 39 3-7-4- مراحل انجام آزمایش TUNEL.. 39 3-7-5- نحوه استفاده از کیت TUNEL.. 40 3-8- بررسی بیان ژن Kdm5d یا Smcy. 40 3-8-1- استخراج RNA به روش ترایزول.. 41 3-8-2- بررسی کیفی RNAهای استخراج شده به وسیله الکتروفورز روی ژل آگارز 42 3-8-3- تیمار کردن نمونه­های RNAی استخراج شده 43 3-8-4- سنتزDNA مکمل (cDNA) از روی الگوی RNA… 44 3-8-5- روش انجام واکنش زنجیرهای پلی مراز (PCR) جهت اطمینان از سنتز cDNA… 46 3-8-6-روش تهیه­ی ژل آگارز و انجام الکتروفورز 48 3-8-7- طرز تهیه­ی محلول­ها 48 1- بافر50x TAE.. 48 2- محلول رنگ آمیزی اتیدیوم برماید (10mg/ml) 48 3-8-8- بررسی کمی بیان ژن با استفاده از روش واکنش زنجیرهای پلیمرازپیوسته. 49 3-8-8-1-روش Ct مقایس­های برای کمی سازی نسبی.. 50 3-8-6- آنالیز آماری.. 52 فصل چهارم نتایج 4-1- بررسی وزن بدن و بافت بیضه پس از 14 روز تزریق.. 54 4-2- بررسی ماکروسکوپی بافت بیضه. 55 4-3- بررسی میزان ROS در بیضه­ی گروه کنترل و آزمون.. 56 4-3-1- اندازه گیری میزان O2 و H2O2 56 این مطلب را هم بخوانید : مروری بر زندگی و کشفیات گالیله ؛ فیلسوف و ریاضیدان ایتالیایی [بخش اول] 4-4- نتایج ارزیابی شکست DNA اسپرم با تست TUNEL.. 59 4-5- بررسی وضعیت بیانی ژن Kdm5d در بافت بیضه. 61 4-5-1- استخراج RNA کل از بافت بیضه. 61 4-5-2- بررسی صحت سنتز cDNA… 62 4-5-3- بررسی بیان کمی ژن Kdm5d در بافت بیضه. 63 فصل پنجم بحث و نتیجه­گیری 5-1- بحث و نتیجه گیری کلی.. 67 5-2- پیشنهادات: 70 منابع.. 71 خلاصه انگلیسی… 80 ضمائم.. 81 فهرست جداول عنوان صفحه جدول 1-1: انواع آنتی­اکسیدان­ها و مکانیسم عملکرد آنها 17 جدول 3-1: ترکیب محیط TCM…. 38 جدول 3-2: ترکیب محیط 38 جدول 3-3: ژن مورد نظر و توالی پرایمر مورد استفاده 40