3-3-2-3. مراحل انجام کشت فرمانتوری باکتری سیاه سرفه…………………………………………………………….. 57
3-3-2-3-1. استریلیزاسیون فرمانتور…………………………………………………………………………………………………… 57
3-3-2-3-2. آماده سازی و بهینه سازی محیط کشت فرمانتوری……………………………………………………… 58
3-3-2-3-3. تلقیح بذر به محیط کشت در فرمانتور…………………………………………………………………………… 58
3-3-3. جداسازی باکتری سیاه سرفه از محیط کشت…………………………………………………………………………. 59
3-3-3-1. جداسازی سلول باکتری با استفاده از سانتریفوژ…………………………………………………………………. 59
3-3-3-2. جداسازی سلول باکتری با استفاده از سیستم میکرو فیلتراسیون……………………………………. 59
3-3-4. غیرفعال سازی سلول باکتری سیاه سرفه………………………………………………………………………………… 60
3-3-5. سمیت زدایی سوسپانسیون باکتری سیاه سرفه………………………………………………………………………. 60
3-3-5-1. سمیت زدایی با استفاده از فرمالین……………………………………………………………………………………… 61
3-3-5-2. سمیت زدایی با استفاده از تیومرسال………………………………………………………………………………….. 61
3-3-6. تست های کنترلی سوسپانسیون سیاه سرفه…………………………………………………………………………… 61
3-3-6-1. تست استریلیتی……………………………………………………………………………………………………………………. 61
3-3-6-2. تست کنترل غیرفعال بودن باكتری…………………………………………………………………………………….. 62
3-3-6-3. تست کنترل سمیت زدایی (MWGT) …………………………………………………………………………… 62
3-3-6-4. تست توانمندی……………………………………………………………………………………………………………………… 62
فصل چهارم: نتایج
4-1. تجدید حیات بذر بر روی محیط بورده ژانگو………………………………………………………………………………… 64
4-2. تهیه بذر در محیط وِروِی……………………………………………………………………………………………………………….. 64
4-3. کشت فرمانتوری باکتری سیاه سرفه برای تولید واکسن……………………………………………………………… 64
4-4. جداسازی باکتری سیاه سرفه از کشت………………………………………………………………………………………….. 67
4-5. غیرفعال سازی و سمیت زدایی باکتری سیاه سرفه برای تولید واکسن……………………………………… 69
4-5-1. سمیت زدایی با فرمالین…………………………………………………………………………………………………………….. 69
4-5-2. سمیت زدایی با تیومرسال…………………………………………………………………………………………………………. 69
4-6. آزمایش های کنترلی سوسپانسیون های سیاه سرفه……………………………………………………………………. 69
4-7. نتایج حاصل از آزمون MWG در کنترل توکسیسیتی سوسپانسیون های سلولی سیاه سرفه
سمیت زدایی شده با فرمالین و تیومرسال…………………………………………………………………………………………….. 72
4-8. آزمون MWG و مقایسه تغییرات اوزان موش ها……………………………………………………………………….. 75
4-9. تست توانمندی واکسن های آزمایشی سیاه سرفه……………………………………………………………………….. 80
فصل پنجم: بحث و پیشنهادات
بحث ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 83
نتیجه گیری و پیشنهادات ………………………………………………………………………………………………………………………. 88
منابع………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 89
خلاصه انگلیسی ……………………………………………………………………………………………………………………………………. 97
ضمایم ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 98
فهرست جداول
عنوان صفحه
جدول1-1. آنتی ژن های مختلف سیاه سرفه…………………………………………………………………………………………… 9
3-3-2-3. مراحل انجام کشت فرمانتوری باکتری سیاه سرفه…………………………………………………………….. 57
3-3-2-3-1. استریلیزاسیون فرمانتور…………………………………………………………………………………………………… 57
3-3-2-3-2. آماده سازی و بهینه سازی محیط کشت فرمانتوری……………………………………………………… 58
3-3-2-3-3. تلقیح بذر به محیط کشت در فرمانتور…………………………………………………………………………… 58
3-3-3. جداسازی باکتری سیاه سرفه از محیط کشت…………………………………………………………………………. 59
3-3-3-1. جداسازی سلول باکتری با استفاده از سانتریفوژ…………………………………………………………………. 59
3-3-3-2. جداسازی سلول باکتری با استفاده از سیستم میکرو فیلتراسیون……………………………………. 59
3-3-4. غیرفعال سازی سلول باکتری سیاه سرفه………………………………………………………………………………… 60
3-3-5. سمیت زدایی سوسپانسیون باکتری سیاه سرفه………………………………………………………………………. 60
3-3-5-1. سمیت زدایی با استفاده از فرمالین……………………………………………………………………………………… 61
3-3-5-2. سمیت زدایی با استفاده از تیومرسال………………………………………………………………………………….. 61
3-3-6. تست های کنترلی سوسپانسیون سیاه سرفه…………………………………………………………………………… 61
3-3-6-1. تست استریلیتی……………………………………………………………………………………………………………………. 61
3-3-6-2. تست کنترل غیرفعال بودن باكتری…………………………………………………………………………………….. 62
3-3-6-3. تست کنترل سمیت زدایی (MWGT) …………………………………………………………………………… 62
3-3-6-4. تست توانمندی……………………………………………………………………………………………………………………… 62
فصل چهارم: نتایج
4-1. تجدید حیات بذر بر روی محیط بورده ژانگو………………………………………………………………………………… 64
4-2. تهیه بذر در محیط وِروِی……………………………………………………………………………………………………………….. 64
4-3. کشت فرمانتوری باکتری سیاه سرفه برای تولید واکسن……………………………………………………………… 64
4-4. جداسازی باکتری سیاه سرفه از کشت………………………………………………………………………………………….. 67
4-5. غیرفعال سازی و سمیت زدایی باکتری سیاه سرفه برای تولید واکسن……………………………………… 69
4-5-1. سمیت زدایی با فرمالین…………………………………………………………………………………………………………….. 69
4-5-2. سمیت زدایی با تیومرسال…………………………………………………………………………………………………………. 69
4-6. آزمایش های کنترلی سوسپانسیون های سیاه سرفه……………………………………………………………………. 69
4-7. نتایج حاصل از آزمون MWG در کنترل توکسیسیتی سوسپانسیون های سلولی سیاه سرفه
سمیت زدایی شده با فرمالین و تیومرسال…………………………………………………………………………………………….. 72
4-8. آزمون MWG و مقایسه تغییرات اوزان موش ها……………………………………………………………………….. 75
4-9. تست توانمندی واکسن های آزمایشی سیاه سرفه……………………………………………………………………….. 80
فصل پنجم: بحث و پیشنهادات
بحث ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 83
نتیجه گیری و پیشنهادات ………………………………………………………………………………………………………………………. 88
منابع………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 89
خلاصه انگلیسی ……………………………………………………………………………………………………………………………………. 97
ضمایم ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 98
فهرست جداول
عنوان صفحه
جدول1-1. آنتی ژن های مختلف سیاه سرفه…………………………………………………………………………………………… 9
جدول1-2. علائم کلینیکی بیماری سیاه سرفه……………………………………………………………………………………… 26
جدول1-3. آنتی بیوتیک های مورد استفاده در درمان سیاه سرفه حاد و رژیم مصرف آن……………….. 34
جدول1-4. واکسیناسیون سیاه سرفه در کشورهای مختلف…………………………………………………………………. 36
جدول2-1. ترکیب محیط لیستر و B2 بر اساس گرم در لیتر…………………………………………………………….. 45
جدول3-1. لیست دستگاه ها و تجهیزات مورد استفاده………………………………………………………………………… 51
جدول3-2. لیست مواد و محیط های مورد استفاده در تولید واکسن سیاه سرفه………………………………. 52
جدول3-3. ترکیبات محیط بورده ژانگو………………………………………………………………………………………………….. 53
جدول3-4. ترکیبات محیط کشت وِروِی………………………………………………………………………………………………… 53
جدول3-5. ترکیبات محیط کشت B2…………………………………………………………………………………………………… 54
جدول3-6. ترکیبات محیط کشت سویابین کازئین………………………………………………………………………………. 55
جدول4-1. اطلاعات دوره كشت باكتری سیاه سرفه برای تولید واكسن…………………………………………….. 68
جدول4-2. نتایج حاصل از انجام آزمایش های غیرفعال سازی و استریلیتی سوسپانسیون های باكتری سیاه سرفه سمیت زدایی شده با فرمالین……………………………………………………………………………………………………………………………….. 70
جدول4-3. نتایج حاصل از انجام آزمایش های غیرفعال سازی و استریلیتی سوسپانسیون های باكتری سیاه سرفه سمیت زدایی شده با تیومرسال…………………………………………………………………………………………………………………………….. 71
جدول4-4. نتایج حاصل از کنترل توکسیسیتی سوسپانسیون های سمیت زدایی شده با فرمالین و تیومرسال با استفاده از آزمون MWG………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 73
جدول4-5. نتایج كنترل توکسیسیتی سوسپانسیون های سمیت زدایی شده با فرمالین با استفاده از آزمون MWG 76
جدول4-6. نتایج كنترل توکسیسیتی سوسپانسیون های سمیت زدایی شده با تیومرسال با استفاده از آزمون MWG 77
جدول4-7. نتایج حاصل از انجام تست توانمندی برای شش واکسن تجربی سمیت زدایی شده با فرمالین (FDV) 80
این مطلب را هم بخوانید :
جدول4-8. نتایج حاصل از انجام تست توانمندی برای شش واکسن تجربی سمیت زدایی شده با تیومرسال (TDV) 81
فهرست نمودارها
عنوان صفحه
نمودار1-1. مقایسه تعداد افراد زیر یک سال ایمن شده با واکسن DTP در سه کشور مختلف در سال
2000 تا 2010 ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 6
نمودار4-1. تغییرات pH کشت سویه 134 از باکتری سیاه سرفه در طول دوره رشد درفرمانتور….. 65
نمودار4-2. تغییرات pH کشت سویه 509 از باکتری سیاه سرفه در طول دوره رشد درفرمانتور….. 65
نمودار4-3. مقایسهی میانگین جذب نوری در طول موج های530 و590 در مقدار جرم باكتری در هنگام برداشت در بچ های مختلف سویه 134 و 509……………………………………………………………………………………………………………… 66
نمودار4-4. مقدار غلظت نهایی باكتری سیاه سرفه (cell109×1) سویه 134 در پایان دوره كشت در هنگام برداشت 66
نمودار4-5. مقدار غلظت نهایی باكتری سیاه سرفه (cell109×1) سویه 509 در پایان دوره كشت در هنگام برداشت 67
نمودار4-6. مقایسه دوره ی سمیت زدایی سوسپانسیون های سلولی سیاه سرفه سویه 134 توسط فرمالین و تیومرسال با استفاده از تست MWG ……………………………………………………………………………………………………………………….. 74
نمودار4-7. مقایسه دوره ی سمیت زدایی سوسپانسیون های سلولی سیاه سرفه در سویه 509 توسط فرمالین و تیومرسال با استفاده از تست MWG……………………………………………………………………………………………………………………….. 74
نمودار4-8. مقایسه اختلاف وزن موش های تزریق شده با واكسن تجربی سمیت زدایی شده با فرمالین نسبت به تیومرسال در سویه 134……………………………………………………………………………………………………………………………………………. 78
نمودار4-9. مقایسه اختلاف وزن موش های تزریق شده با واكسن تجربی سمیت زدایی شده با فرمالین
نسبت به تیومرسال در سویه 509………………………………………………………………………………………………………. 78
نمودار4-10. مقایسه اختلاف وزن موش های تزریق شده با سوسپانسیون های سمیت زدایی شده سویه 134 با تیومرسال و فرمالین نسبت به موش های گروه كنترل……………………………………………………………………………………………….. 79
نمودار4-11. مقایسه اختلاف وزن موش های تزریق شده توسط واكسن سیاه سرفه حاصل از سمیت
زدایی با فرمالین وتیومرسال در سمیت زدایی درسوش509 توسط تست MWG ……………………….. 79
نمودار4-12. مقایسه نتایج حاصل از توانمندی واكسن های تجربی سمیت زدایی شده با فرمالین (FDV) با واكسن های تجربی سمیت زدایی شده با تیومرسال((TDV …………………………………………………………………………………… 81
فهرست اشكال
جدول1-2. علائم کلینیکی بیماری سیاه سرفه……………………………………………………………………………………… 26
جدول1-3. آنتی بیوتیک های مورد استفاده در درمان سیاه سرفه حاد و رژیم مصرف آن……………….. 34
جدول1-4. واکسیناسیون سیاه سرفه در کشورهای مختلف…………………………………………………………………. 36
جدول2-1. ترکیب محیط لیستر و B2 بر اساس گرم در لیتر…………………………………………………………….. 45
جدول3-1. لیست دستگاه ها و تجهیزات مورد استفاده………………………………………………………………………… 51
جدول3-2. لیست مواد و محیط های مورد استفاده در تولید واکسن سیاه سرفه………………………………. 52
جدول3-3. ترکیبات محیط بورده ژانگو………………………………………………………………………………………………….. 53
جدول3-4. ترکیبات محیط کشت وِروِی………………………………………………………………………………………………… 53
جدول3-5. ترکیبات محیط کشت B2…………………………………………………………………………………………………… 54
جدول3-6. ترکیبات محیط کشت سویابین کازئین………………………………………………………………………………. 55
جدول4-1. اطلاعات دوره كشت باكتری سیاه سرفه برای تولید واكسن…………………………………………….. 68
جدول4-2. نتایج حاصل از انجام آزمایش های غیرفعال سازی و استریلیتی سوسپانسیون های باكتری سیاه سرفه سمیت زدایی شده با فرمالین……………………………………………………………………………………………………………………………….. 70
جدول4-3. نتایج حاصل از انجام آزمایش های غیرفعال سازی و استریلیتی سوسپانسیون های باكتری سیاه سرفه سمیت زدایی شده با تیومرسال…………………………………………………………………………………………………………………………….. 71
جدول4-4. نتایج حاصل از کنترل توکسیسیتی سوسپانسیون های سمیت زدایی شده با فرمالین و تیومرسال با استفاده از آزمون MWG………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 73
جدول4-5. نتایج كنترل توکسیسیتی سوسپانسیون های سمیت زدایی شده با فرمالین با استفاده از آزمون MWG 76
جدول4-6. نتایج كنترل توکسیسیتی سوسپانسیون های سمیت زدایی شده با تیومرسال با استفاده از آزمون MWG 77
جدول4-7. نتایج حاصل از انجام تست توانمندی برای شش واکسن تجربی سمیت زدایی شده با فرمالین (FDV) 80
جدول4-8. نتایج حاصل از انجام تست توانمندی برای شش واکسن تجربی سمیت زدایی شده با تیومرسال (TDV) 81
فهرست نمودارها
عنوان صفحه
نمودار1-1. مقایسه تعداد افراد زیر یک سال ایمن شده با واکسن DTP در سه کشور مختلف در سال
2000 تا 2010 ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 6
نمودار4-1. تغییرات pH کشت سویه 134 از باکتری سیاه سرفه در طول دوره رشد درفرمانتور….. 65
نمودار4-2. تغییرات pH کشت سویه 509 از باکتری سیاه سرفه در طول دوره رشد درفرمانتور….. 65
نمودار4-3. مقایسهی میانگین جذب نوری در طول موج های530 و590 در مقدار جرم باكتری در هنگام برداشت در بچ های مختلف سویه 134 و 509……………………………………………………………………………………………………………… 66
نمودار4-4. مقدار غلظت نهایی باكتری سیاه سرفه (cell109×1) سویه 134 در پایان دوره كشت در هنگام برداشت 66
نمودار4-5. مقدار غلظت نهایی باكتری سیاه سرفه (cell109×1) سویه 509 در پایان دوره كشت در هنگام برداشت 67
نمودار4-6. مقایسه دوره ی سمیت زدایی سوسپانسیون های سلولی سیاه سرفه سویه 134 توسط فرمالین و تیومرسال با استفاده از تست MWG ……………………………………………………………………………………………………………………….. 74
نمودار4-7. مقایسه دوره ی سمیت زدایی سوسپانسیون های سلولی سیاه سرفه در سویه 509 توسط فرمالین و تیومرسال با استفاده از تست MWG……………………………………………………………………………………………………………………….. 74
نمودار4-8. مقایسه اختلاف وزن موش های تزریق شده با واكسن تجربی سمیت زدایی شده با فرمالین نسبت به تیومرسال در سویه 134……………………………………………………………………………………………………………………………………………. 78
نمودار4-9. مقایسه اختلاف وزن موش های تزریق شده با واكسن تجربی سمیت زدایی شده با فرمالین
نسبت به تیومرسال در سویه 509………………………………………………………………………………………………………. 78
نمودار4-10. مقایسه اختلاف وزن موش های تزریق شده با سوسپانسیون های سمیت زدایی شده سویه 134 با تیومرسال و فرمالین نسبت به موش های گروه كنترل……………………………………………………………………………………………….. 79
نمودار4-11. مقایسه اختلاف وزن موش های تزریق شده توسط واكسن سیاه سرفه حاصل از سمیت
زدایی با فرمالین وتیومرسال در سمیت زدایی درسوش509 توسط تست MWG ……………………….. 79
نمودار4-12. مقایسه نتایج حاصل از توانمندی واكسن های تجربی سمیت زدایی شده با فرمالین (FDV) با واكسن های تجربی سمیت زدایی شده با تیومرسال((TDV …………………………………………………………………………………… 81
فهرست اشكال