3-20-4- تائید بررسی کیفیت استخراج DNA………………………………………………………………………………61
3-20-4-1- تهیه ژل آگاروز……………………………………………………………………………………………………..61
3-20-4-1-1- تهیه بافر(TAE)Tris-Acetate-EDTA………………………………………………………………..61
3-20-5- انجام فرایند واکنش زنجیره پلیمراز(PCR)……………………………………………………………………..62
3-20-5-2- شرایط واکنش PCR………………………………………………………………………………………………62
3-20-5-3- بررسی محصولات PCR………………………………………………………………………………………..63
3-20-5-4- خالص سازی محصولات PCR……………………………………………………………………………….63
3-20-6- تعیین توالی نوکلئوتیدی قطعات تکثیر شده از ژن 16S rRNA………………………………………….63
3-20-7- مقایسه توالی نوکلئوتید ژن 16S rRNA سویه‌های اکتینومایست منتخب…………………………….63
فصل چهارم: نتایج
4-1- شرایط پیش تخمیر و تخمیر و میزان متابولیت تولید شده توسط40 سویه اکتینومیست بررسی شده در این پژوهش………………………………………………………………………………………………………………………………65
4-2- نتایج حاصل از تست ارزیابی سمیت متابولیت‌های ثانویه………………………………………………………..68
4-3- نتایج مربوط به بررسی ریخت شناسی سلولها در تست سمیت سلولی………………………………….. 71
4-4- نتایج مربوط به تست سمیت سلولی با روش MTT……………………………………………………………….72
4-5- بررسی ریخت‌شناسی سلولها پس از تیمار با عصاره سویه‌ی اکتینومیست‌های منتخب………………74
4-6- شناسایی اکتینومیست‌های منتخب………………………………………………………………………………………..74
4-6-1- بررسی ریخت شناسی اکتینومیست‌های منتخب…………………………………………………………………74
4-6-2- تعیین ایزومر DAP موجود در دیواره سلولی…………………………………………………………………… 76
4-6-3- بررسی فیلوژنتیکی اکتینومیست‌های منتخب………………………………………………………………………77
4-6-3-1- تائید استخراجDNA اکتینومیست‌های منتخب………………………………………………………………77
4-6-4- تائید استخراج ژن16S rRNA از ژل آگاروز……………………………………………………………………..77
4-6-4-1- نتایج مربوط به توالی خوانی ژن 16S rRNA……………………………………………………………….78
فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری
منابع……………………………………………………………………………………………………………………………………….. 91
چکیده انگلیسی…………………………………………………………………………………………………………………101
پیوست‌ها………………………………………………………………………………………………………………………….102
فهرست جداول
عنوان صفحه
جدول 1‑1: میزان شیوع و مرگ و میر ناشی از انواع سرطان در هر دو جنس زن ومرد. 25
جدول 1‑2: تغییرات تنوع سرطان در ایران در طی سال‌های 1376-1318.. 27
جدول 1‑3:گروه‌های مختلف اکتینومیست‌ها 29
جدول 1‑4: تعدادی از متابولیت‌های استخراج شده توسط اکتینومیست‌ها 32
جدول 3‑1:مواد شیمایی استفاده شده 39
جدول 3‑2:دستگاه‌های استفاده شده 42
جدول 3‑3:ترکیبات محیط کشت ISP2 اصلاح شده 44
جدول 3‑4:ترکیبات محیط پیش تخمیر. 45
جدول 3‑5:نمک‌های مورد نیاز برای تهیه آب نمک دریایی مصنوعی.. 46
جدول 3‑6:ترکیبات مورد استفاده درتهیه محیط کشت دودمان A549. 49
جدول 3‑7:ترکیبات محیط کشت… 58
جدول 4‑1:نتایج حاصل از مرحله ی تولید واستخراج متابولیت‌های ثانویه. 64
جدول 4‑2:درصد کشندگی در عصاره‌ها با محدوده اثری بین 40-59% (محدوده اثر خوب). 67
جدول 4‑3:درصد کشندگی در عصاره‌ها با محدوده اثری بین 39-20% (محدوده اثر متوسط). 69
جدول 4‑4:درصد کشندگی در عصاره‌ها با محدوده اثری بین 0-19% (محدوده اثرضعیف). 70
جدول 4‑5: نتایج مربوط به بررسی مرفولوژی سلول پس از تیمار با عصاره‌ها 70
جدول 4‑6: نتایج مربوط به مقایسه مقدار جذب بین عصاره‌ها با شاهد…………………………………………….. 72
جدول 4‑7: شماره دسترسی در Gene Bank ومیزان تشابه اکتینومیست‌های منتخب با اکتینومیست‌های ثبت شده براساس ترادف نوکلئوتید‌های ژن 16S rRNAدر ژنوم…………………………………………………………… 80
فهرست نمودارها
عنوان صفحه
نمودار 4‑1:مقایسه میانگین مقدار جذب بین عصاره‌های سویه‌هایی که 05/0≥p داشتندبا شاهد(A549). 73
این مطلب را هم بخوانید :
فهرست اشکال صفحه
شکل 1‑1: ساختمان شیمیایی داکتینومایسین.. 12
شکل 1‑2: ساختمان شیمیایی دانوروبیسین.. 14
شکل 1‑3: ساختمان شیمیایی دوکسوروبیسین.. 16
شکل 1‑4: ساختمان شیمیایی میترامایسین.. 17
شکل 1‑5:ساختمان شیمیایی بلئومایسین.. 18
شکل 1‑6:ساختمان شیمیایی میتومایسین.. 20
شکل 1‑7: ساختمان شیمیایی استرپتوزوستین.. 22
شکل 3‑1: این تصاویر به عنوان نمونه از میزان آسیب میباشد که برای درک بهتر هر مفهوم آسیب دیدگی……………………………………………………………………………………………………………………………………….54
شکل 4‑1: تصاویر مربوط به بررسی ریخت‌شناسی سلولها پس از تیمار سلول A549 با عصاره باکتری‌ها…………………………………………………………………………………………………………………………………….73
شکل 4‑2: بررسی ریخت شناسی سویه UTMC 863. 74
شکل 4‑3: بررسی ریخت شناسی سویه UTMC 919. 74
شکل 4‑4: بررسی ریخت شناسی سویه UTMC 877. 74
شکل 4‑5: بررسی ریخت شناسی سویه UTMC 676. 75
شکل 4‑6: بررسی ریخت شناسی سویه UTMC 638. 75
شکل 4‑7: مربوط به استخراج DNA اکتینومیست‌های منتخب… 76
شکل 4‑8: مربوط به استخراج ژن 16S rRNA میباشد. 77
|
[چهارشنبه 1399-07-02] [ 12:57:00 ق.ظ ]
|
