فهرست جداول

فهرست نمودار ها

فهرست شکل‌ها

نظر علامه طباطبایی
 R

شکل 1-1  ساختار ال- آسپاراژیناز	3
شکل ‏1- 2 ساختار سه‌بعدی یک آنزیم آسپاراژیناز تولیدشده توسط Yersinia pestis(شناسه PBD: 3NTX )	6
شکل ‏1-3 شرح تصویری یک مدل مورفینی	11
شکل 1-4  هم‌ترازی بین ال-آسپاراژیناز	13
شکل1-5 توپولوژی از ال-آسپاراژیناز	14
شکل1-6  تصویرسازی از زیر واحد A آنزیم	14
شکل1-7  این کاریکاتور تشکیل دایمر بین مونومر A , C	15
شکل1-8 باقی‌مانده سایت فعال و اسیدآسپارتیک (لیگاند)	15
شکل1-9  اثرات متقابل در a , b با توجه به ارتباطات نزدیک در دایمر	16
شکل1-10  ساختار تترامر ال-آسپاراژیناز	17
شکل1-11 شکل نواری از آنزیم	17
شکل ‏1-12 واکنش میلارد. شاخه Z در اسیدآمینه آسپاراژین، CH2CONH2	25
شکل ‏1-13نقش کاتالیزوری آنزیم آسپاراژیناز در شکستن آسپاراژین	25
شکل1-14  مکانیسم عمل ال-آسپاراژیناز(نارتا و همکاران 2007)	26
شکل3-1 محیط  MMYبراث	44
شکل3-2 لوله‌های آماده‌شده جهت اسپکتروفتومتری	46
شکل4-1 تغییر رنگ محیط کشت بر اثر تولید آنزیم	61
شکل4-2مشاهده میکروسکوپی باکتری‌ها	62
شکل4-3 محصول PCR مورد تائید برای کلونینگ	66
شکل4- 4 رشد باکتری حاوی پلازمید نوترکیب روی محیط آمپی سیلین دار	66
شکل4-5 گسترش باکتری نوترکیب روی محیط آمپی سیلین دار جدید	67
شکل4 -6 کشت باکتری نوترکیب در LB برای PEX	67
شکل4 – 7 ران کردن پلازمید نوترکیب از پلیت ماتریکس روی ژل1% –    8	این مطلب را هم بخوانید :	67
شکل4 – 8 ران کردن پلازمید نوترکیب از پلیت ماتریکس روی ژل1% – 5 R	68
شکل4-9  پلازمید نوترکیب استخراج شده برروی ژل 1%	68
شکل4-10 تکثیر قطعه هدف از روی پلازمید نوترکیب استخراجی	69
شکل 4-11  هم تراز سازی توالی نمونه  5 R	71
شکل 4-12 هم تراز سازی توالی نمونه ی  8 R	77

چکیده فارسی

آنزیم آسپاراژیناز به‌طور عمده در پزشکی برای درمان لوسمی لنفوبلاستی حاد[1]  و در صنایع غذایی برای کاهش تولید اکریل‌آمید در مواد غذایی نشاسته داری که سرخ یا برشته می‌شوند کاربرد دارد. ازآنجاکه ال- آسپاراژیناز[2]  جداشده از باکتری‌های مختلف دارای اثرات ضد سرطانی متفاوتی بوده است، جستجو برای یافتن میکروارگانیسم‌های تولیدکننده این آنزیم، یکی از راه‌های اصلی جهت دستیابی به آنزیمی با خصوصیات درمانی ایده آل می‌باشد. هدف این تحقیق جداسازی و شناسایی مولکولی باکتری‌های تولیدکننده ال-آسپاراژیناز از خاک‌ بوده است. نمونه‌های خاک از منابع مختلف نظیر جنگل، مزرعه، باغچه گرفته‌شده و پس از تهیه سوسپانسیون روی محیط کشت کشت داده شدند. کلنی‌های تولیدکننده‌ی آنزیم ال-آسپاراژیناز ، بر اساس تغییر رنگ محیط از زرد به صورتی متمایز گردیدند. میزان فعالیت آن بر اساس روش نسلر موردبررسی قرار گرفت. باکتری‌های‌ تولیدکننده آنزیم دارای فعالیت مطلوب، پس از شناسایی بیوشیمیایی با روش مولکولی PCR مورد شناسایی قرار گرفتند و ‌توالی rRNA S 16نیز مورد ارزیابی قرار گرفت. بر اساس نتایج بدست آمده ،  بهترین و بیشترین میزان تولید آنزیم توسط باکتری های باسیلوس تورنجسیس و باسیلوس سرئوس و Oerskovia turbata  می باشد. بنابراین مطالعه حاضر نشان داد نمونه های خاک حاوی باکتری های مولد آنزیم ال-آسپاراژیناز می باشد.

کلمات کلیدی: آسپاراژیناز ،لوسمی،باکتری‌های مولد، نمونه‌های خاک

فصل اول

کلیات

مقدمه

آنزیم‌ها به‌عنوان تسریع‌کننده‌های واکنش‌های شیمیایی نقش مهمی در شکل‌گیری حیات سلولی  به‌نحوی‌که امروزه می‌شناسیم  ایفا می‌کنند. به‌کارگیری هدفمند آنزیم‌ها به‌منظور مداخله در سیر واکنش‌های شیمیایی و بیوشیمیایی همواره یکی از موضوعات موردتوجه در صنعت و پزشکی بوده است( رائو، 1999)

باکتری‌ها از اصلی‌ترین منابع تولید آنزیم به شمار می‌رود.. در این تحقیق باکتری‌های جداشده از خاک‌های مناطق  مختلف استان گلستان (مزرعه، جنگل، باغ) ازنظر تولید آنزیم ال-آسپاراژیناز خارج سلولی